Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說(shuō)明書
Super-BradfordProteinAssayKit
Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說(shuō)明書
Cat.No. K0013
保存：2-8℃
組分說(shuō)明
Catalogno. K0013
KitSize 800 次/微孔，100 次/試管
BradfordProteinAssayReagent 200ml
BSA 標(biāo)準(zhǔn)液（2mg/ml） 2ml
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Bradford 法是簡(jiǎn)dan和快速的比色蛋白定量方法。這一方法基于考馬斯亮藍(lán) G-250 與蛋白質(zhì)結(jié)合后，產(chǎn)生藍(lán)色化合物，反應(yīng)迅速而穩(wěn)定。反應(yīng)化合物在 465-595nm 處有大的光吸收值，化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關(guān)系，因此可通過(guò)檢測(cè) 595nm 的光吸收值的大小來(lái)計(jì)算蛋白的含量。本產(chǎn)品將傳統(tǒng)的 Bradford 方法進(jìn)行了改良，大限度的加大蛋白定量的線性范圍，變異性小于普通考馬斯亮藍(lán)染色法，靈敏度范圍為 100-1,500 μg/ml。使用本產(chǎn)品反應(yīng)迅速，顏色產(chǎn)物 1 小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定。本試劑盒適用于多種緩沖液系統(tǒng)，不受金屬離子、還原劑和螯合劑的干擾。
注意事項(xiàng)
1. 如待測(cè)樣品中含較多的干擾物質(zhì)（具體見附表 1），可采用 BCA 蛋白定量試劑盒（K0014）或其他蛋白定量產(chǎn)品。
2. BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液需與待測(cè)樣品的稀釋液一致（可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水進(jìn)行稀釋）。
3. 本試劑盒不適合含有去污劑的蛋白定量，所測(cè)蛋白分子量必須大于 3kD。
4. 操作中請(qǐng)佩戴手套。
5. 本產(chǎn)品僅限科研使用。
操作步驟（以大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)為例）
1. 稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品：用與待測(cè)蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品。
管號(hào) 稀釋液用量（μl） BSA標(biāo)準(zhǔn)品用量（μl） BSA標(biāo)準(zhǔn)品終濃度（μg/ml）
A 0 100 2,000
B 50 150 1,500
C 200 200 1,000
D 200 200（從C管中?。? 500
E 200 200（從D管中?。? 250
F 200 200（從E管中?。? 125
G 200 0 0(空白)
2. 試管檢測(cè)（檢測(cè)范圍：100-1500 μg/ml）
1）按上表稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，將 30 μl 稀釋好的 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品分別加到作好標(biāo)記的試管中。
2）取干凈的試管，分別加入 30 μl 待測(cè)蛋白樣品(原液或稀釋液)，并作好標(biāo)記，推薦每個(gè)測(cè)定做 2-3 個(gè)平行反應(yīng)。
3）向步驟 1）和步驟 2）的試管中各加入 1.5mlBradfordProteinAssayReagent，充分混勻，室溫放置 10 分鐘。
4）用分光光度計(jì)測(cè)定 595nm 處的吸光值。
5）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中的蛋白濃度。
注意：數(shù)據(jù)處理時(shí)需要去除明顯錯(cuò)誤的值。未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計(jì)算機(jī)繪制得曲線，可以從計(jì)算機(jī)給出的線性方程式計(jì)算出未知樣品的濃度。
6）如果所得到的蛋白濃度不在檢測(cè)范圍內(nèi)，請(qǐng)重新稀釋樣品后再次測(cè)定。
3. 微孔檢測(cè)（檢測(cè)范圍：100-1500 μg/ml）
1）將按表 1 稀釋好的 A-GBSA 標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)蛋白樣品（原液或稀釋液）各 5 μl 分別加到作好標(biāo)記的 96 孔板微孔中。
2）每孔加入 250 μlBradfordProteinAssayReagent，充分混勻，蓋上 96 孔板蓋，室溫放置 10 分鐘。
4）用酶標(biāo)儀測(cè)定 595nm 處的吸光值。
5）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中的蛋白濃度。
注意：數(shù)據(jù)處理時(shí)需要去除明顯錯(cuò)誤的值。未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計(jì)算機(jī)繪制得曲線，可以從計(jì)算機(jī)給出的線性方程式計(jì)算出未知樣品的濃度。
6）如果所得到的蛋白濃度不在檢測(cè)范圍內(nèi)，請(qǐng)重新稀釋樣品后再次測(cè)定。
附表
附表 1. 干擾物質(zhì)表
化合物 耐受濃度 化合物 耐受濃度
緩沖液 去垢劑和變性劑
乙酸鹽 0.6M Brij35 干擾
甘氨酸 0.1M 脫氧膽酸納 0.25%
HEPES 0.1M CHAPS 1%
MES 0.7M NP-40 干擾
MOPS 0.2M 辛葡糖 2%
Na + -檸檬酸 50mM SDS 0.1%
PIPES 500mM Tween-20 干擾
磷酸鈉/磷酸鈉 1M TritonX-100 0.1%
乙酸鈉 0.6M 糖類
Tris 2M 蔗糖 1mM
鹽類 螯合劑
硫酸銨 1M EDTA 100mM
NaCl 1M EGTA 50mM
尿素 6M
極性化合物 其他
甘油 99% HCl 0.1M
還原劑 NaOH 0.1M
β-巰基乙醇 1M NAD 1mM
DTT 1M 苯 5%
